Wetenschappers gebruiken het plasmide maxiprep protocol wanneer ze nodig hebben om grote hoeveelheden plasmide DNA uit een cultuur van de cel. In feite is het enige belangrijke verschil tussen protocollen miniprep, midiprep en maxiprep is het bedrag van de cultuur van de cel gebruikt en dus de totale plasmide DNA opgeleverd. Gebaseerd op het Promega Maxiprep Protocol, zijn er drie essentiële stappen.
Celcultuur
Getransformeerd, of plasmide-bevattende, E. coli bacteriën zijn geteeld op een agarplaat en gebruikt om te enten van 100 tot 200 mL Bouillon Luria Bertani (LB). De cultuur is vervolgens geplaatst op een shaker-plaat in een incubator 37 graden Celsius en toegestaan om te groeien voor 12 tot 21 uur. Optimale cel volume wordt bereikt om 12 tot 16 uur.
Lysis van de cel
De bacteriecultuur is Ingehuld als met behulp van een centrifuge en de supernant of de Bouillon kan worden getrokken uit. Een oplossing van natriumhydroxide en natrium dodecyl sulfaat (SDS) wordt toegevoegd aan de pellet voor het opwekken van cellulaire lysis. Vanwege de grote hoeveelheid cellen, moet worden gezorgd om ervoor te zorgen dat de cel pellet volledig resuspends in oplossing. Anders zal niet alle cellen worden lysed en de potentiële opbrengst van de plasmide DNA is zwaar beïnvloed.
DNA-extractie
Extractie van plasmide DNA gebruikt een alkaline oplossing, in dit geval natriumhydroxide-oplossing, om te denatureren genomic (bacteriële) DNA en plasmide DNA. Wanneer de oplossing terug naar een neutrale pH is gebracht, is het plasmide DNA wordt veel kleiner dan de genomic DNA staat opnieuw gloeien. De genomic DNA precipiteren uit de oplossing tijdens centrifugeren of vacuüm kolom extractie verlaten relatief zuiver plasmide DNA in de schorsing of gebonden aan de kolom.
